Анализ волос PEGASUS® GC-HRT+ для поиска целевого аналита

В данном примере будет рассмотрен количественный анализ гидроксибутирата в волосах с использованием обработки комплексных данных GC-HRT для поиска целевого аналита.

Введение.

Было доказано, что анализ образцов волос очень ценен для выявления воздействия и определения уровня злоупотребления наркотиками в течение продолжительных периодов времени. В этом исследовании два метода подготовки образцов были протестированы на предмет их эффективности при извлечении гамма-гидроксибутирата (ГОМК) из образцов волос. GHB является эндогенным соединением, а также препаратом, обычно используемым бодибилдерами. Кроме того, его наблюдали в клубах и использовали для сексуальных посягательств с применением наркотиков. Было показано, что скорость элиминации ГОМК составляет 18 мг/л/ч, поэтому он обычно выводится из крови в течение 6 часов и из мочи в течение 12 часов после перорального приема. К счастью, он остается в волосах в течение длительного периода времени и может быть легко обнаружен с помощью времяпролетной масс-спектрометрии высокого разрешения (ГХ-ВРТ), как показано на рисунке 1.® фирменное программное обеспечение для быстрого количественного определения целевых аналитов. Кроме того, будут также обсуждаться нецелевые аналиты, поскольку комплексный характер анализа TOFMS в сочетании с деконволюцией высокого разрешения ChromaTOF-HRT® ( HRD® ) позволяет определять целевые и нецелевые соединения в одном сборе данных.

Эксперимент.

Образцы волос были получены от двух добровольцев (А и В) и трижды промыты деионизированной водой с обработкой ультразвуком в течение 5 минут с последующим трехкратным промыванием дихлорметаном с обработкой ультразвуком в течение 5 минут. Затем образцы высушивали между фильтровальной бумагой в течение ночи и разделяли на два набора: 1) набор Bead Ruptor (A1, A2; B1, B2) и 2) набор Cut (A3, A4; B3, B4). Набор Bead Ruptor гомогенизировали с помощью Biotage Bead Ruptor 24. Набор 2 разрезали на сегменты по 1-3 мм с помощью ножниц. Каждый образец (по 20 мг каждый), а также холостой образец и 5 калибраторов (0,15-5,0 нг/мг ГОМК) помещали в микроцентрифужные пробирки и добавляли 1 мл метанола и 50 мкл ГОМК-d6 (1 мкг/мл). каждая трубка. Образцы инкубировали в течение ночи при 40°C при перемешивании, а затем сушили газообразным азотом. Дериватизацию проводили путем смешивания сухих образцов со 100 мкл БСТФА и нагревания в течение 1 часа при температуре 60°С. Полученные продукты переносили во флаконы для ГХ объемом 2 мл для анализа ГХ-ГРТ.

Таблица 1. Условия ГХ-ВПМС высокого разрешения.

Результаты и обсуждение.

Программное обеспечение марки ChromaTOF-HRT использовалось для обработки данных для качественного (HRD, комплексная обработка) и количественного анализа (Target Analyte Finding или TAF, количественная обработка). TAF данных GC-HRT использовали для определения концентрации ГОМК в каждом образце (рис. 2). Использование функции TAF в ChromaTOF-HRT является удобным методом ретроспективного анализа данных и включает в себя добавление аналитов, внутренних стандартов и соответствующих точных окон времени удерживания ионов с допусками по массе (Da, mDa или ppm) в целевые таблицы. Он идеально подходит для обработки больших наборов образцов и/или анализа следов. Калибровочная кривая для ГОМК (внутренний стандарт = ГОМК-d6) была построена с использованием количественного определения и эталонных ионов m/z = 233,1024 и 239,1400 (рис. 3,4). Применение кривой к образцам A и B с использованием обработки ChromaTOF-HRT привело к концентрациям GHB, перечисленным в таблице 2. Концентрации для образцов A и B «Bead» были выше, чем для образцов «Cut». Кроме того, у добровольца Б было больше GHB по сравнению с образцами волос добровольца А.